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檢驗科人員是核酸檢測工作的主力軍，我們不但要保證檢測結果的有效性，還時(shí)刻面臨著(zhù)被感染的風(fēng)險。本文為大家講解《PCR實(shí)驗室新冠核酸檢測操作注意事項》，重點(diǎn)從新冠病毒生理特性、熒光PCR原理、PCR實(shí)驗室籌備規范、樣本檢測環(huán)節操作、實(shí)驗室數據分析、常見(jiàn)問(wèn)題解析等幾個(gè)方面討論學(xué)習。
1、傳染源
目前所見(jiàn)傳染源主要是新型冠狀病毒感染的患者。無(wú)癥狀感染者也可能成為傳染源。
2、傳播途徑
經(jīng)呼吸道飛沫和密切接觸傳播是主要的傳播途徑。在相對封閉的環(huán)境中長(cháng)時(shí)間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在經(jīng)氣溶膠傳播的可能。由于在糞便及尿中可分離到新型冠狀病毒，應注意糞便及尿對環(huán)境污染造成氣溶膠或接觸傳播。
3、熒光PCR原理
4、常見(jiàn)問(wèn)題解析
①新冠試劑出現翹尾，怎么處理？
答：如果是個(gè)別單一通道翹尾，不管是FAM還是VIC通道，首先按照要求復查，復查建議重新采樣，如果不方便重新采樣建議對原有樣本進(jìn)行重新提取核酸驗證，如果復查陰性判讀陰性，如果復查還是同一通道翹尾，就要對結果仔細審核，一是要排除實(shí)驗室污染，二是要對病人信息了解清楚，從臨床癥狀及接觸史排查，如果沒(méi)法確認，建議必須重新采樣復查，如有必要可以采用另一家試劑來(lái)驗證。如果出現大量的弱陽(yáng)性擴增翹尾，首要原因是考慮實(shí)驗室污染，可以通過(guò)做環(huán)境樣本和陰性對照做驗證排除。
②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因嗎，靈敏度哪個(gè)更高？是否會(huì )和其他冠狀病毒片段重疊？
答：N基因跟1ab都是特異的，不會(huì )跟其他呼吸道病原體交叉反應。設計時(shí)候，兩個(gè)基因的序列不一樣，導致靈敏度不一樣，N基因的靈敏度比1ab靈敏度高。
答：新冠病毒由于是RNA病毒，容易降解，另外檢測結果也和取樣，核酸提取以及樣本本身的核酸濃度有關(guān)，需要逐一分析，同時(shí)可以結合臨床癥狀判讀。
答：因為試劑采用的是內源性?xún)葮?，內源性?xún)葮耸怯萌嗽椿驑擞?，此基因存在于人的表皮細胞內，操作過(guò)程中就可能會(huì )出現人源性的污染，另外環(huán)境污染也有可能導致內標增長(cháng)，這也是前面提到的建議做環(huán)境樣本質(zhì)控。
答：如果新冠樣本內標不出，該樣本必須復查，可重新混勻該樣本提取核酸，如果重新提取該樣本內標還是不出，在排除提取問(wèn)題的情況下，說(shuō)明采樣不合格，要通知臨床重新采樣復查。
答：因為新冠試劑檢測的是人內源性?xún)葮?，環(huán)境樣本一般不含有人源細胞，所以檢測不出內標；偶爾檢出內標，可能該環(huán)境樣本上有人源性細胞粘附，故而檢出內標。
重復進(jìn)行“變性 - 退火 - 延伸” 三個(gè)過(guò)程，模板DNA的量就會(huì )呈指數倍增加，理論上講經(jīng)過(guò) n 個(gè)循環(huán)之后，模板量就會(huì )達到2的n次方。
③新冠檢測結果和臨床診斷不符合，怎么解讀？
④采用生理鹽水做陰性對照，內標也會(huì )增長(cháng)，怎么解釋?zhuān)?/strong>
⑤新冠樣本內標不出如何處理？
⑥采集環(huán)境樣本檢測新冠狀病毒，為啥大部分樣本內標不出，偶爾個(gè)別樣本檢測出內標？
