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學(xué)會(huì )正確地進(jìn)行細胞培養是細胞實(shí)驗的基礎，養好細胞是很多實(shí)驗成功的關(guān)鍵。
然而，對于養細胞的人來(lái)說(shuō)，真的是不想看到細胞的污染。
細胞的污染將直接導致實(shí)驗材料的不純凈，造成數據的錯誤，及后續實(shí)驗結果的不可靠。
因此，細胞的污染一旦出現，往往代表著(zhù)實(shí)驗按下暫停鍵，又要重復進(jìn)行前面的細胞獲取和培養實(shí)驗，很可能幾個(gè)月的埋頭苦干就此白費。
細胞培養中的常見(jiàn)污染
細胞污染是一個(gè)很廣的范圍，微生物的種類(lèi)更是各種各樣，不同的污染的原因不同處理也不同，因此掌握對常見(jiàn)細胞污染的識別至關(guān)重要。
細胞培養中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有細菌污染、支原體污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及交叉污染等污染。
每一種污染都有各自的特點(diǎn)。如細菌和霉菌增殖迅速，短時(shí)間就對細胞造成明顯傷害；而支原體和病毒對細胞的影響則是一種緩慢長(cháng)期的過(guò)程。
污染的預防
微生物污染在細胞培養中是非常常見(jiàn)的，也是令人頭大的一件事情。而預防是防止細胞培養過(guò)程中發(fā)生污染的最好辦法。只有預防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。
根據統計培養細胞產(chǎn)生的污染源，常常來(lái)自于不潔的環(huán)境和不規范的實(shí)驗操作，比如受污染的培養基、試劑或儀器。因此，一般預防可從以下幾方面著(zhù)手：
（1）在培養液中添加抗生素。
可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時(shí)會(huì )影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗結果。
（2）從消毒滅菌著(zhù)手
①細胞培養所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無(wú)菌試驗陰性后才能使用。
玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒：1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上；2)干烤消毒140℃ 2小時(shí)以上。
培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無(wú)菌試驗：將血清按10%加入培養基內，用無(wú)菌的玻璃離心管或玻璃瓶取完全培養基5-10ml置培養箱內培養2-3天，肉眼見(jiàn)無(wú)渾濁或沉淀等異物。分裝后置4℃保存。
消化液(pH7.8)或其它加入液，應用高壓蒸汽滅菌或一次性無(wú)菌濾器過(guò)濾除菌，分裝成置-20℃保存。
②操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔消毒滅菌。
定期清洗或更換超凈臺過(guò)濾膜、預濾網(wǎng)。
CO2培養箱的清潔是較易被忽視的地方，應1-2個(gè)月對培養箱定期進(jìn)行清潔消毒。先用75%酒精擦拭培養箱內壁、隔板、水盤(pán)2-3次，用雙蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外燈照射1h以上或進(jìn)行高溫高壓滅菌處理。水盤(pán)內加入無(wú)菌水（應每周更換），待培養箱內溫度、濕度、CO2濃度穩定后再放入細胞。
在細胞間內準備專(zhuān)用的儀器如離心機，移液器，水浴鍋等，并定期進(jìn)行消毒，減少細胞污染的可能性。
③實(shí)驗環(huán)境的徹底消毒
甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑，其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。
實(shí)驗環(huán)境紫外照射 15~30 min 滅菌
（3）規劃實(shí)驗操作
雖然，養細胞的步驟很簡(jiǎn)單無(wú)非是換液、傳代、凍存、復蘇。但是具體有好多小細節需要注意....
進(jìn)入實(shí)驗室環(huán)境時(shí)，佩戴好口罩及手套，穿上潔凈實(shí)驗服，避免灰塵或唾液進(jìn)入培養物中。
超凈臺用紫外燈照射30-60min，并開(kāi)啟超凈臺風(fēng)機運轉5-10min，然后用75%酒精球擦拭超凈臺臺面，再開(kāi)始實(shí)驗操作。
進(jìn)入超凈臺前應用75%酒精對雙手及手腕進(jìn)行全面擦拭，確保除菌完全。
實(shí)驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內。生物安全柜和超凈工作臺里的東西能少盡少。東西過(guò)多會(huì )干擾氣流，反而更不安全，并且在物品的擺放要有一定的順序分區要規劃好。這樣細胞在生物安全柜或者超凈臺才能安全。
操作動(dòng)作要輕，必須在火焰周?chē)鸁o(wú)菌區內打開(kāi)瓶口，并將瓶口轉動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要說(shuō)話(huà)，若打噴嚏或咳嗽應轉向背面。
操作時(shí)小心取用無(wú)菌物品，應避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應立即更換；手及物品不要在暴露的瓶口上方來(lái)往，容器打開(kāi)后，傾斜45度操作，操作完成后及時(shí)蓋上瓶蓋。
操作時(shí)要常更換吸管，一旦發(fā)現吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去。實(shí)驗完畢用消毒水浸泡的紗布擦臺面。
實(shí)驗用品用完應移出超凈臺，以利于空氣流通。
實(shí)驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面。
（4）防止細胞交叉污染
在進(jìn)行多種細胞培養操作時(shí)，所用器具要嚴格區分，即使不同細胞使用相同的培養基也不要共享同一瓶培養基，避免細胞間的交叉污染。
每次操作最好只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生不同細胞間的污染；
在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和滴管不要觸及細胞培養瓶瓶口，以免把細胞帶到培養液中污染其他細胞。
（5）所有新購入或接入的細胞，必須及時(shí)保種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復蘇細胞，繼續培養，這是抵御污染最直接有效的辦法。
養好細胞的方法就一種，就是細心，在操作上下功夫
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